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近期，西北农林科技大学周恩民团队在抗PRRSV感染领域取得新进展，团队将一种细胞穿膜肽(TAT)与纳米抗体Nb6进行融合表达，获得融合蛋白TAT-Nb6。实验表明该融合蛋白可成功进入细胞，并对I型和II型PRRSV毒株均有显著抑制作用。相关成果在线发表在Journal of Virology上，原文题为“A Nanobody Targeting Viral Non-Structural Protein 9 Inhibits Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Replication”。

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)，是由PRRS病毒(PRRSV)感染所致的一种猪的急性传染病。现有的疫苗对该病的保护作用非常有限，而且目前还没有抗PRRSV感染的特异药物。因此，新型抗PRRS病毒药物的研发具有重要意义。

PRRSV非结构蛋白Nsp9具有RNA依赖的RNA聚合酶活性，是病毒最重要的复制酶。Nsp9不仅能与一些宿主细胞蛋白和病毒蛋白自身发生互作，从而影响病毒增殖，而且Nsp9与病毒的毒力有着密切的关系。因此，Nsp9适合作为抗病毒药物的潜在靶点。我们前期筛选到一株PRRSV非结构蛋白Nsp9特异性纳米抗体Nb6，并证明稳定表达Nb6的MARC-145细胞系显著抑制PRRSV的复制。但是，由于细胞膜具有选择透过性，基因重组的Nb6蛋白无法进入细胞发挥抗病毒作用。

本研究中，研究人员将一种细胞穿膜肽(TAT)与纳米抗体Nb6进行融合表达，获得融合蛋白TAT-Nb6。首先通过ELISA和pull-down实验，证明了原核表达的TAT-Nb6能够特异性结合PRRS病毒Nsp9。接着利用间接免疫荧光(IFA)、Western-blot和流式细胞术等实验，证明了TAT-Nb6可以进入MARC-145细胞和猪肺泡巨噬细胞(PAMs)(图1A)。在抗PRRSV细胞试验中发现，TAT-Nb6对基因I型和II型PRRSV毒株均有抑制作用(图1B)。进一步利用酵母双杂交技术，找到了Nb6 特异性结合Nsp9的区域为Nsp9aa454-551 和Nsp9aa599-646(图1C)，氨基酸序列比对发现，两种基因型的Nsp9aa454-646同源性为%。本项研究证明:原核表达的TAT-Nb6能够进入细胞，通过特异性靶向PRRSV非结构蛋白Nsp9实现抗病毒作用。

图1. A)TAT-Nb6进入MARC-145和PAMs细胞中;B)TAT-Nb6对两种基因型PRRSV均有抑制作用;C)TAT-Nb6特异性结合Nsp9的区域为:Nsp9aa454-551 和Nsp9aa599-646。

本文共同第一作者为博士研究生王立珍、张璐和博士后黄柏成，共同通讯作者为陈红英和周恩民教授;本研究工作获得国家重点研发计划项(2017YFD0, 2016YFD05007)和国家自然基金重点项目()资助。

周老师教授团队主要从事PRRSV和动物及人兽共感染戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)的研究。研究了抗PRRSV GP5抗独特型抗体对PRRSV感染的调控;发现了MYH9作为PRRSV感染宿主细胞不可或缺的蛋白，MYH9与GP5互作而介导PRRSV感染易感细胞。分离获得首个禽HEV中国分离株，鉴定了禽HEV可以跨种属感染哺乳动物;鉴定出猪HEV中和抗原表位。

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